Духовное и физическое здоровье - самое ценное достояние личности



Подсчет выросших колоний





После предварительных испытаний убедились, что пробирки с косым распределением плотной питательной среды, в которых обычно выращиваются микобактерий туберкулеза, малопригодны для исследования этих микроорганизмов генетическими методами.

Посевной материал распределяется на поверхности среды неравномерно, что затрудняет подсчет выросших колоний. Что же касается чашек Петри, то, учитывая необходимость длительного инкубирования посевного материала, приходится принимать меры, предупреждающие высыхание среды. Это создает дополнительные трудности в работе и значительно снижает объем возможных посевов. Поэтому мы пользовались пробирками с поперечной вырезкой, которые применяются при определении концентрации антибактериальных препаратов в биологических средах или при исследованиях лекарственной устойчивости микроорганизмов методом вертикальной диффузии.

Для любого разведения препарата до и после каждого облучения было использовано по 4 пробирки, в каждой из которых содержалось 7 мл питательной среды. В пробирки засевали по 0,25 мл испытуемой суспензии. Следовательно, подсчет колоний, выросших в 4 пробирках, давал возможность определить количество мутантов в 1 мл микробной суспензии. Аналогичным образом засевали разные разведения микробной суспензии на питательную среду без содержания туберкулостатических препаратов для установления количества жизнеспособных клеток до и после каждого облучения.

Эти посевы в первом ориентировочном опыте показали, что наиболее приемлемыми для подсчета колоний явились результаты посева суспензии, разведенной в 100 тысяч раз, а в последующих четырех опытах - в 10 млн. и даже 100 млн. раз. В этих опытах была применена более концентрированная суспензия, так как в первом, ориентировочном, опыте после облучения оказалось недостаточное количество индуцированных мутантов. Их было не намного больше фона, а результат такого исследования достоверен лишь при разнице их по сравнению с фоном не менее одного порядка.

Эпидемиология туберкулеза